Oznaczanie ilościowej zawartości alkoholu we krwi
Do ilościowego oznaczania alkoholu we krwi służą metody chemiczne. Badania te, będące domeną sądowej chemii analitycznej, wykonuje się w specjalnie do tego wytypowanych laboratoriach. Lekarz biegły musi znać ogólne zasady tych badań i umieć interpretować ich wyniki.
■Zawartość alkoholu we krwi określa się w większości krajów w ilości gramów na 1000 gramów krwi („promille"), w niektórych innych — w procentach. Aktualnie stosowane są trzy metody:
Metoda Widmarka
Najbardziej rozpowszechnionÄ… metodÄ… w ostatnim pięćdziesiÄ™cioleciu byÅ‚a (i w wieki krajach jest jeszcze) metoda opracowana w roku 1922 przez szwedzkiego chemika E. Widmarka. Alkohologia sÄ…dowo-lekarska zawdziÄ™cza jej swój rozwój. Jest to metoda mikrochemiczna — do jej wykonania wystarcza 0,5 g krwi. IloÅ›ciowe oznaczanie alkoholu polega w tej metodzie na wykorzystaniu wÅ‚aÅ›ciwoÅ›ci redukujÄ…cej alkoholu. DokÂÅ‚adnie odważonÄ… (lub odmierzonÄ…) ilość badanej krwi umieszcza siÄ™ w „gniazdku" pod szklanym korkiem, szczelnie zamykajÄ…cym specjalnÄ… koÅ‚bkÄ™, na której dnie znajduje siÄ™ dokÅ‚adnie odmierzona ilość roztworu dwuchromianu potasowego w stężonym kwasie siarkowym. W ciÄ…gu
2 godzin „destylacji" w temp. 60° (kolbki umieszczone sÄ… w cieplarce lub Å‚aźni wodnej) alkohol z krwi przechodzi — w wyniku higroskopij-nego dziaÅ‚ania stężonego kwasu siarkowego — do roztworu dwuchroÂmianu potasowego, redukujÄ…c go. Natomiast alkohol utlenia siÄ™. ZaÂwartość kolbki rozcieÅ„cza siÄ™ i dodaje siÄ™ do niej jodku potasowego, który pod wpÅ‚ywem niezredukowanego dwuchromianu wydziela wolny jod, Ilość wolnego jodu zależy od niezredukowanego dwuchromianu, a ta z kolei — od iloÅ›ci alkoholu zawartego we krwi. Dodany naÂstÄ™pnie roztwór skrobi zabarwia siÄ™ pod wpÅ‚ywem jodu na niebiesko; nastÄ™pnie całą zawartość kolbki miareczkuje siÄ™ roztworem tiosiarczanu sodowego, który wiąże wolny jod powodujÄ…c ponowne odbarwienie roz-
* niepotrzebne skreślić.
tworu. Ilość tiosiarczanu sodowego, zużyta do odbarwienia, jest proÂporcjonalna do iloÅ›ci wolnego jodu, a ta z kolei zależy od zawartoÅ›ci alkoholu w badanej krwi. Im wiÄ™cej alkoholu zawiera badana krew, tym mniejpozostaje niezredukowanego dwuchromianu i tym mniej wolnego joÂdu powstaje z jodku potasowego. MaÅ‚a ilość tiosiarczanu sodowego zuÂżyta do odbarwienia roztworu Å›wiadczy o dużej zawartoÅ›ci alkoholu we krwi. Ustalona przez Widmarka proporcja tiosiarczanu do alkoholu jest nastÄ™pujÄ…ca: 0,01 ml n/100 tiosiarczanu sodowego odpowiada l,13y (gamÂma) alkoholu.
KażdÄ… krew bada siÄ™ w opisany sposób trzykrotnie i z trzech uzyskaÂnych wyników oblicza siÄ™ Å›redniÄ…, przyjmujÄ…c jÄ… jako czynnik ostaÂteczny. PostÄ™powanie to stosuje siÄ™ do kontroli i zwiÄ™kszenia dokÅ‚adÂnoÅ›ci oznaczania. Do zalet tej metody należą: wzglÄ™dna prostota, stoÂsunkowo duża dokÅ‚adność i możność równoczesnego, seryjnego oznaczaÂnia licznych próbek, przy wspomnianym już niewielkim zużyciu mateÂriaÅ‚u. Nie jest to metoda Å›ciÅ›le swoista dla alkoholu etylowego (etanoÂlu), gdyż wykazuje również alkohol metylowy (metanol) i inne wyższe alkohole, a także eter, np. użyty do narkozy. W zasadzie jest to meÂtoda wykazujÄ…ca lotne substancje o wÅ‚asnoÅ›ciach redukujÄ…cych, do któÂrych należy również alkohol. Nie umniejsza to jednak jej wartoÅ›ci, gdyż substancje redukujÄ…ce, nie pochodzÄ…ce od alkoholu spożytego, mogÄ… tylÂko wyjÄ…tkowo wystÄ™pować we krwi i to w iloÅ›ciach, które nie majÄ… znaczenia praktycznego. To samo dotyczy bardzo niewielkich iloÅ›ci alÂkoholu, który wytwarzać siÄ™ może w ustroju „endogennie", tj. samoistnie, pod wpÅ‚ywem procesów przemiany materii; jest to tzw. „alkohol fizjoÂlogiczny", którego zawartość we krwi, stwierdzona tÄ… metodÄ…, osiÄ…gać może wartoÅ›ci nie przekraczajÄ…ce 0,03%o. Nieswoiste substancje reduÂkujÄ…ce, tj. nie pochodzÄ…ce od spożytego alkoholu i nie bÄ™dÄ…ce alkohoÂlem, wytwarzać siÄ™ mogÄ… we krwi zupeÅ‚nie wyjÄ…tkowo na skutek czynÂników, które zostanÄ… szczegółowo omówione niżej. Zawartość tych subÂstancji we krwi, wykazywana za pomocÄ… próby Widmarka, odpowiada setnym częściom „promilla", a wiÄ™c drugiej liczbie po przecinku, w uÅ‚amÂkach dziesiÄ™tnych, np. 0,01%o. Tak niewielkie wartoÅ›ci nie majÄ… znaczeÂnia w stwierdzeniu stanu „wskazujÄ…cego na użycie alkoholu" lub nieÂtrzeźwoÅ›ci i jej stopnia. Ogólnie można przyjąć, że wszystkie te nieÂswoiste czynniki, które — poza alkoholem spożytym — mogÄ… być powoÂdem dodatnich wyników próby Widmarka, nie osiÄ…gajÄ… w sumie wartoÂÅ›ci wyższych niż 0,2%o. Jest to maksymalna wartość, którÄ… można przyÂjąć — i to z dużym „marginesem bezpieczeÅ„stwa" — jako nie pochodzÄ…ÂcÄ… od alkoholu spożytego. MieszczÄ… siÄ™ w niej zarówno nieswoiste substancje redukujÄ…ce i alkohol fizjologiczny, jak i dopuszczalne błędy laboratoryjne. Przytaczanie tych nieswoistych czynników, mogÄ…cych w minimalnym stopniu wpÅ‚ynąć na wynik badania, jako argumentów obrony — w sprawach o przestÄ™pstwa popeÅ‚nione po spożyciu alkoholu — jest caÅ‚kowicie nieuzasadnione. Z powyższego wynika, że u osób, u których we krwi (prawidÅ‚owo pobranej) wykazano za pomocÄ… próby
15 Orzecznictwo lekarskie 99^
Widmarka (bezbłędnie wykonanej) wartości wyższe niż 0,2%o i które bronią się tym, że uzyskany wynik nie pochodzi od spożytego alkoholu
— tÅ‚umaczenia takie sÄ… bezpodstawne. Dobitnie podkreÅ›la to nastÄ™pujÄ…ca uchwaÅ‚a I Zjazdu Polskich Medyków SÄ…dowych w Warszawie w r. 1955*: „Wykrycie we krwi alkoholu powyżej 0,20 promille Å›wiadczy o tym, że badany osobnik w chwili pobrania próbki znajdowaÅ‚ siÄ™ w stanie wskaÂzujÄ…cym na użycie alkoholu".
Metoda enzymatyczna (ADH)
ZaletÄ… tej metody jest niemal caÅ‚kowita swoistość dla alkoholu etyloÂwego. Za jej pomocÄ… można wykazywać również wyższe alkohole (alÂkohol aÅ‚lylowy, butanol, propanol), które jednak mogÄ… wystÄ™pować we krwi gnijÄ…cej, a nie w Å›wieżej krwi pobranej od osób żyjÄ…cych. W meÂtodzie tej enzym ADH (alkoholowa dehydrogenaza) katalizuje przemiaÂnÄ™ alkoholu do aldehydu octowego; uwolniony przy tym wodór redukuje koenzym NAD na NADH, którego ilość — na podstawie pochÅ‚anianego promieniowania ■— można okreÅ›lić spektrofotometrycznie. Liczne, konÂtrolne badania porównawcze wykazaÅ‚y caÅ‚kowitÄ… jej zgodność z metodÄ… Widmarka. Jako swoista dla alkoholu, metoda ta nie wykazuje innych substancji redukujÄ…cych. W przypadku, gdy znajdujÄ… siÄ™ one we krwi
— wartości uzyskane za pomocą badania metodą Widmarka są nieco wyższe od uzyskanych metodą ADH.
Metoda chromatografii gazowej
Jest to najnowoczeÅ›niejsza i pod każdym wzglÄ™dem najlepsza meÂtoda, wprowadzona do toksykologii i chemii sÄ…dowej w latach sześćdzieÂsiÄ…tych bieżącego stulecia. Za jej pomocÄ… można jakoÅ›ciowo i iloÅ›ciowo okreÅ›lać różne alkohole oraz inne substancje redukujÄ…ce, nawet w ich mieszaninach. W krótkinTczasie można zbadać dużą ilość próbek krwi lub innych pÅ‚ynów ustrojowych.
Chromatografia gazowa polega na przepuszczaniu badanej substancji (ostatnio stosuje siÄ™ powietrze znad próbki krwi zmieszanej w szczelnym naczyniu z odpowiednim wzorcem) przez kolumnÄ™ chromatograficznÄ…. Detektor pÅ‚omieniowo-jonizujÄ…cy rejestruje na przesuwajÄ…cym siÄ™ paÂpierze wychylenia pochodzÄ…ce od wzorca (np. butanolu) i — w razie obecnoÅ›ci alkoholu etylowego lub innej badanej substancji — od niego. Porównanie poÅ‚ożenia oraz wielkoÅ›ci wychyleÅ„ (peak) w stosunku do wielkoÅ›ci wychylenia od wzorca (charakterystycznych dla każdej z baÂdanych substancji) pozwala na jej zidentyfikowanie i iloÅ›ciowe oznaÂczenie. OdnoÅ›nie do napojów alkoholowych zachodzi nawet możliwość ich rozróżnienia (piwo, wino, koniak — wg Arbaba i Prokopa) na podÂstawie wystÄ™powania charakterystycznych dla nich skÅ‚adników towaÂrzyszÄ…cych (olejki eteryczne, estry, fuzle itp.).
PoniAno opracowaniami wprowadzenia do praktyki coraz to doskoÂnalszych metod, klasyczna już dziÅ› metoda Widmarka nie straciÅ‚a na znaczeniu. Wypróbowana w ciÄ…gu ponad 50 lat w wielu krajach, w set-
kach tysiÄ™cy badaÅ„, stanowi nadal niezawodnÄ… i Å‚atwÄ… do stosowania w praktyce próbÄ™. DoÅ›wiadczenia zebrane przy jej stosowaniu oraz jej modyfikacje — opracowane w wielu najpoważniejszych oÅ›rodkach nauÂkowych medycyny sÄ…dowej caÅ‚ego Å›wiata — zebrane sÄ… w olbrzymim już dziÅ› piÅ›miennictwie na ten temat. Najważniejsze pozycje znajdzie CzyÂtelnik w zestawieniach piÅ›miennictwa zawartych w tej książce i w cyÂtowanych w niej dzieÅ‚ach.
Za pomocą trzech omówionych wyżej metod można badać nie tylko
krew, lecz również inne substancje biologiczne, np.-mocz i inne płyny
ustrojowe (płyn mózgowo-rdzeniowy, oiało szkliste oka) oraz wyciągi
z tkanek. Jak już w innym miejscu wspomniano, badanie moczu ma szcze-
gólnie duże znaczenie. W materiale pobieranym ze zwłok —■oprócz mo-
czu — mają znaczenie płyny ustrojowe z zamkniętych przestrzeni (ciało
szkliste oka, maź stawu kolanowego, płyn mózgowo-rdzeniowy), gdyż
stosunkowo długo opierają się gniciu; natęży to mieć na uwadze w przy-
padku zwłok rozkładających się.